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    1. 新品上市 | 腺相關病毒(AAV)滴度檢測試劑盒

             常用的病毒基因傳遞載體包括逆轉錄病毒(RV)、腺病毒(AdV)、腺相關病毒(AAV)、慢病毒(LV)和單純皰疹病毒(HSV)。其中,AAV屬于細小病毒科,是其中最小的單鏈和無囊膜DNA病毒,目前已發現的血清型11種。在所有不同血清型的AAV中,重組AAV-2是最常用的一種,它可以通過輔助病毒或Cell Biolabs提供AAV Helper-Free System來體外生產出高滴度重組病毒。AAV-2可以感染分裂細胞和非分裂細胞,并能在人類宿主細胞中維持,具有一定的基因穩轉潛力。由于AAV-2是一種天然缺陷型病毒,需要在反式結構中提供若干因子才能進行生產性感染,因此被公認最安全的病毒載體。近年來,利用DNA重組技術開發了一種新型的載體AAV-DJ,是從8種不同血清型AAV重組而來的一個混合衣殼,使其能在各種不同細胞和組織中具有顯著較高體外感染效率的載體。重組的AAV-2和AAV-DJ病毒都可通過CsCl梯度超離法、碘二醇密度梯度超離法或Cell Biolabs的AAV純化試劑盒來純化。

       

             利用病毒載體來轉導基因必須要準確測量病毒滴度。傳統檢測AAV滴度是通過DNA斑點雜交或類似方法來定量AAV基因組拷貝數(GC)。然而這些方法耗時耗力,且穩定性不佳。對于已經高度純化的病毒樣品,也通常用其在260nm的吸光度來估算病毒粒子總數,但這種方法不適用于未純化的病毒上清,因為其中的雜質成分會影響260nm的光吸收度。

       

              西美杰代理的Cell Biolabs提供了一種快速全面的用于檢測純化后的AAV滴度的試劑盒QuickTiter? AAV Titer ELISA Kit。該試劑盒包含一個96孔板和足夠檢測96個樣本的試劑,包括已滅活的AAV標準品,通過標準曲線能夠計算出樣品中純化后的AAV滴度。該試劑盒檢測靈敏度為6.25×108 GC/mL,能夠檢測AAV-1,AAV-2,AAV-3,AAV-5,AAV-6,AAV-8,AAV-9,AAV-10,AAV-DJ和AAV-DJ/8多種血清型的AAV滴度,并且適用于所有表達系統生產的AAV。

       

      檢測原理

             AAV衣殼是由VP1、VP2和VP3三種蛋白質混合構成,平均每一個病毒粒子中包含60個VP分子,其比例為5 VP1 : 5 VP2 : 50 VP3。試劑盒中提供的96孔板已預包被了可以結合三種VP蛋白的捕獲抗體,當AAV樣品或標準品加入到96孔板中,其AAV衣殼蛋白就會與捕獲抗體結合。經過孵育和洗板等步驟后,再分別加入AAV VP衣殼抗體和HRP標記的二抗,而未結合的抗體將被洗脫下來。經底物顯色后,測定450nm處的吸光度,最后通過AAV標準曲線計算未知樣品中AAV衣殼蛋白濃度,進而計算出樣本中AAV滴度。

      下圖展示了AAV滴度檢測試劑盒的標準曲線結果。

       

      產品特點

      • 通過檢測純化后的重組AAV衣殼蛋白來確定AAV滴度;
      • AAV定量結果由標準酶標儀讀??;
      • 試劑盒中提供滅活的AAV標準品;
      • 適用于多種血清型AAV滴度測定,包括AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-5, AAV-6, AAV-8, AAV-9, AAV-10, AAV-DJ and AAV-DJ/8

       

      產品信息

      貨號

      規格

      VPK-5146

      QuickTiter? AAV Titer ELISA Kit

      96 assays

      VPK-5146-5

      QuickTiter? AAV Titer ELISA Kit

      5 x 96 assays

       

      Cell Biolabs公司坐落于美國加利福尼亞州圣地亞哥市,一直致力于開發生命科學研究領域的技術和工具,并將所開發的創新性技術成果商業化。Cell Biolabs孜孜不倦的完善產品,以期使細胞功能和疾病機制研究達到新高度。Cell Biolabs公司的產品獨具特色并且處于行業前沿水平,全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用。北京西美杰科技有限公司是Cell Biolabs中國一級代理,為用戶提供完善的技術支持與售后服務。如您對上述產品感興趣,歡迎撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網站www.mhlsqj.com了解更多信息。

       

      引用文獻

      1. Rabinowitz, J, and Samulski, R. J. (1998) Curr. Opin. Biotechnol., 9, 470-475.

      2. Summerford, C., and Samulski, R. J. (1999) Nat. Med., 5, 587-588.

      3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

      4. Sonntag, F., Schmidt, K., and Kleinschmidt, J.A. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A., 107, 10220-5.

       

       

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