
? ?眾所周知,在治療性抗體藥物開發和生產的多個階段,大規模樣本的IgG定量是必不可少的關鍵步驟。傳統的IgG定量方法如高效液相色譜(HPLC)、ELISA等,都有成本高、耗時耗力、通量低等缺點。而Valita?Titer則采用了一種基于熒光偏振的IgG定量新技術,可以幫助藥物開發者更加準確、高效地篩選出最佳生產方案(如下圖)。

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Valita?Titer檢測原理——熒光偏振技術
熒光偏振可以有效地分析分子大小的改變。如果被激發的熒光物質處于靜止狀態,該物質仍保持原有激發光的偏振性;如果被激發的熒光物質處于運動狀態,那么該物質發出的偏振光將區別于原有激發光的偏振特性,也就是所謂的熒光去偏振現象。在溶液中,小分子比大分子運動速度更快,利用熒光偏振原理,通過檢測熒光分子與目標分子結合前后的偏振光值的改變,就可以實現目標分子的快速定量。Valita?Titer就是一種基于熒光偏振的相對、即時、定量分析細胞培養上清中IgG或Fc融合蛋白的一種新方法,適用于液體樣品中IgG的檢測。

Valita?Titer檢測原理:應用熒光偏振法檢測含有Fc段的IgG分子。小的未結合的分子在溶液中快速旋轉(圖片上側)導致偏振光的降低;而大的結合的分子旋轉緩慢(圖片下側)則保留了偏振光。
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Valita?Titer方法是將能夠與IgG?Fc段特異性結合的FITC標記的熒光探針包被在微孔板中,當Valita?Titer探針與IgG的Fc段結合時,會形成比未結合形式旋轉更慢的復合物,導致其發射光的偏振增加。通過讀取已知濃度標準品和待檢樣品的熒光偏振值變化,最終可以計算出待檢樣品中IgG的含量。Valita?Titer方法可以檢測所有基于IgG Fc的抗體(包括IgG1、2、3、4亞型,標準、雙特異性抗體及融合蛋白等)。
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Valita?Titer實驗流程

如上圖所示,Valita?Titer整個實驗流程無需對樣本做任何處理,無需額外添加任何試劑,更沒有洗板等復雜操作步驟,僅需不到15分鐘就能完成96個樣的IgG定量,非常地簡單高效!
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Valita?Titer適用儀器平臺
Valita?Titer兼容市面上常見的多種熒光偏振讀板儀,并且由于Valita?Titer的實驗流程非常簡單,該方法不光局限于人工手動操作,還能整合入各種半自動、全自動生產線中,從而實現真正的高通量檢測。

Valita?Titer兼容多種市面常見品牌的讀板儀

Valita?Titer能整合入各種自動化生產線
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Valita?Titer產品信息
板子規格 |
96孔板;384孔板 |
檢測范圍 |
2.5mg/L–100mg/L (貨號?VAL003); 100mg/L–2000mg/L (貨號?VAL004, PLUS) |
檢測精確度 |
2-4 mg/L (貨號?VAL003); 20-40 mg/L (貨號?VAL004, PLUS) |
檢測所需時間 |
<10 min (貨號?VAL003);<20 min (貨號?VAL004) |
標記熒光 |
FITC (激發波長= 490nm,發射波長= 525nm) |
IgG Fc結合多肽 |
Protein G結構域?GB1 |
IgG種屬 |
人、小鼠、兔、牛、馬、猴等。 |
IgG類型 |
所有含有IgG Fc段的抗體,包括標準單抗、雙抗、融合蛋白等 |
IgG亞型(人) |
1,2,3,4 |
IgG輕鏈類型 |
Lambda (λ),?Kappa (κ) |
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Valita?Titer方法優勢特點
- 基于熒光偏振技術的檢測方法
- 實驗流程快速高效,無需樣本處理,孵育時間短,沒有洗板步驟
- 高通量,有96/384孔板兩種規格
- 能夠輕松適配各種自動化工作站
- 從藥物發現到生產的整個過程都適用
- 高性價比
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