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    1. Mirus品牌FAQ

      1、 Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020TransIT-X2®三者的區別是什么?

      2、TransIT®-LT1轉染試劑的主要成分是什么?

      3、TransIT®-2020轉染試劑的主要成分是什么?

      4、TransIT®-2020適用于轉染哪些細胞?

      5、ransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?

      6、TransIT-X2® Dynamic Delivery SystemPEIPolyethyeleneimine)是類似的東西嗎?

      7、TransIT-X可用于貼壁和懸浮細胞轉染嗎?

      8、TransIT-X可以轉染原代細胞嗎?

      9、TransIT-X可以轉染神經細胞嗎?

      10、抗生素會影響轉染試劑的作用嗎?

      11、如何優化轉染效率?

      12、轉染結果不理想時該怎么辦?

       



       

       

      1、Mirus廣譜DNA轉染試劑TransIT®-LT1、TransIT®-2020TransIT-X三者的區別是什么?

      TransIT®- LT1、TransIT®-2020TransIT-X2®都是高效的廣譜轉染試劑,但它們的化學性質不同,三者特點見下表。TransIT-X2是首選用于高效基因表達及敲除的廣譜轉染試劑。TransIT-X2能高效地轉染質粒DNAsiRNA,也可用于二者共轉。TransIT®-LT1TransIT®-2020僅適用于質粒DNA的轉染。TransIT®-2020TransIT-X2®都是無動物源成分配方,因此可滿足有條件限制的應用需求,例如藥物開發等。對于不同的細胞類型,不同轉染試劑表現效果也有不同,因此對于不同細胞類型的具體應用,可以參考我們的轉染試劑推薦方案數據庫Reagent Agent。(https://www.mirusbio.com/tech-resources/transfection-database

      特點

      TransIT-X2® Dynamic Delivery System

      TransIT®-2020 Transfection Reagent

      TransIT®-LT1 Transfection Reagent

      轉染核酸類型

      DNA, siRNA, miRNA, pre-miRNA

      DNA

      DNA

      細胞毒性

      極低

      高效基因敲除

      ?

      不適用*

      不適用*

      DNAsiRNA共轉

      ?

      不適用

      不適用

      動物源成分

      *:目的基因敲除也可以通過轉染編碼shRNA的質粒DNA來實現,但該方法敲除基因不如siRNA/miRNA高效。

       

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      2、TransIT®-LT1轉染試劑的主要成分是什么?

      TransIT®-LT1是一種非脂質體的廣譜轉染試劑,主要配方是由脂質及蛋白/聚胺混合物組成。它是市面上第一款脂類/聚合物復合配方轉染試劑,同時具備高轉染效率和低細胞毒性特征。

       

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      3、TransIT®-2020轉染試劑的主要成分是什么?

      TransIT®-2020是一種專利的脂類-聚合物混合配方轉染試劑,可與DNA形成多聚物脂復合物。TransIT®-2020配方中不含任何動物源成分。

       

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      4、TransIT®-2020適用于轉染哪些細胞?

      TransIT®-2020是廣譜轉染試劑,適用于轉染多種類型細胞。

      · 細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞(例如HepG2, MCF-7, Neuro-2a,K562,Jurkat等)點擊右側鏈接可以查看適用TransIT®-2020轉染的細胞類型View a complete listing of cell lines transfected using TransIT®-2020 (PDF),

      · 原代細胞和干細胞View a complete listing of primary and stem cells transfected using TransIT®-2020 (PDF)。

       

       

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      5、TransIT-X2® Dynamic Delivery System的主要成分是什么?

      TransIT-X2® Dynamic Delivery System是一種先進的非脂質體轉染系統,由一種全新型聚合物搭配Mirus專利配方,更容易與核酸形成復合物,適用于質粒DNA與小分子核酸如siRNA、miRNA、pre-miRNA等的高效轉染。此外,TransIT-X2®還能實現質粒DNAsiRNA共轉染。TransIT-X2®配方中不含任何動物源成分。

       

       

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      6、TransIT-X2® Dynamic Delivery SystemPEIPolyethyeleneimine)是類似的東西嗎?

      不是的。TransIT-X2®是一種全新的聚合物配方,并非基于PEI的改良產品。

       

       

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      7、TransIT-X可用于貼壁和懸浮細胞轉染嗎?

      可以。經測試,我們已經TransIT-X2成功轉染過多種貼壁細胞(如CHO-K1,HepG2,原代人乳腺上皮細胞等)和懸浮細胞(如Freestyle 293-F。

       

       

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      8、TransIT-X可以轉染原代細胞嗎?

      可以。TransIT-X適用于轉染多種原代細胞,我們已經測試過HUVECs,原代人乳腺上皮細胞(HMEC)以及正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)等原代細胞轉染效率都不錯。

       

       

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      9、TransIT-X可以轉染神經細胞嗎?

      可以。我們測試過iCell® Neurons, SH-SY5Y, SK-N-MC and PC-12等神經細胞轉染效率都很不錯。點擊右側鏈接可以查看適用TransIT-X轉染的細胞類型以及推薦用量。View a complete listing of cell types transfected using TransIT-X2® by Mirus scientists and corresponding starting reagent-to-nucleic acid ratios. (PDF)

       

       

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      10、抗生素會影響轉染試劑的作用嗎?

      某些抗生素如卡那霉素是陽離子,會抑制轉染試劑/核酸形成復合物,因此我們建議在轉染試劑復合物形成這一環節不要使用抗生素。轉染試劑復合物形成后,我們就可以加入到含有低水平抗生素的完全細胞培養基里了(例如將100×-鏈霉素雙抗稀釋到0.1-1×工作濃度的細胞培養基)。

       

       

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      11、如何優化轉染效率?

      1)      轉染時的細胞密度 (%) 大多數細胞在轉染時細胞密度最好能達到40%-80%,但是不同類型細胞有其最佳的轉染密度,在優化轉染效率時要先確認細胞的最佳轉染密度;

      2)      轉染試劑與DNA比例轉染試劑與DNA的使用比例通常是1-4ul1ugDNA,不同細胞可根據實際轉染效率進行不同配比的優化;

      3)      DNA質粒的質量轉染用的DNA必須是無菌,高濃度,且去除內毒素的質粒。Mirus有一款內毒素去除試劑盒(MiraCLEAN® Endotoxin Removal Kit,貨號MIR5900/MIR5910)可以質粒中殘存的內毒素;

      4)      轉染試劑與核酸形成復合物要在無血清的培養基中進行血清可能會干擾轉染試劑與核酸形成復合物,因此在配置轉染試劑與核酸復合物時需要無血清、無抗生素的培養基,將復合物加入細胞的時候,細胞培養基是可以含血清的。

       

       

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      12、轉染結果不理想時該怎么辦?

      Mirus每款轉染試劑的說明書最后都有TROUBLESHOOTING GUIDE,可以幫助客戶對照結果查找問題原因,大部分轉染不理想的問題都可以通過優化操作步驟來解決,因此每一個使用Mirus轉染試劑的客戶,都應在轉染前認真閱讀產品說明書。

       

       

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